Objective: To study the behavior of SHED cell culture on different types of materials for the regeneration of periodontal tissues with different porosity.
Material and methods: Porous collagen material Fibro-Gide (Geitstlich Pharma AG, Switzerland), designed to increase the volume of the gum and the barrier collagen membrane Bio-Gide (Geitstlich Pharma AG, Switzerland) were studied in vitro on SHED cultures. As a control sample, a Spongostan sponge made of gelatin (Johnson & Johnson Medical, UK) with the most pronounced porosity and wettability was used. Acute cytotoxicity was determined using a screening method for assessing the number of living cells in a sample (MTT test). SHED cells were sown on the materials to study the attachment of cells to materials and their migration inside the samples. Before seeding, the cells were stained with vital fluorescent dye PKH26 (red fluorescent cell linker kit, Sigma, Germany) for further visualization.
Results and discussion: Using the MTT test it was shown that they do not have cytotoxic effects. At the same time by the 8th day of the experiment in the presence of Fibro-Gide and Bio-Gide the cells showed an increase in proliferative activity by 19% and 12%, respectively compared with the control group. The cells attached and spread out on the surface of the materials and migrated into the thickness of porous Fibro-Gide and Spongostan.
Conclusion: The in vitro study showed that the most favorable material for SHED cell culture is the collagen material Fibro-Gide with sufficient porosity, elasticity and hydrophilicity. SHED cells attach to the collagen matrix and easily penetrate into the sample, filling the entire internal space, while the proliferative capacity of the cell culture increases.
Цель исследования: Изучение поведения культуры клеток SHED на разных видах материалов для регенерации тканей пародонта с различной пористостью.
Материал и методы: В словиях in vitro на культурах SHED исследованы пористый коллагеновый материал Fibro-Gide (Geitstlich Pharma AG, Швейцария), предназначенный для увеличения объема десны, и барьерная коллагеновая мембрана Bio-Gide (Geitstlich Pharma AG, Швейцария). В качестве контрольного образца использовали губку Spongostan, изготовленную из желатина (Johnson & Johnson Medical, Великобритания) с максимально выраженными пористостью и смачиваемостью. Острую цитотоксичность определяли с помощью скринингового метода оценки количества живых клеток в пробе (МТТ-теста). Для изучения прикрепления клеток к материалам и их миграции внутрь образцов на материалы высевали клетки SHED. Перед высеванием клетки окрашивали витальным флуоресцентным красителем PKH26 (Red Fluorescent Cell Linker Kit, Sigma, Германия) для дальнейшей визуализации.
Результаты и обсуждение: С помощью МТТ-теста установлено, что материалы не оказывают цитотоксического воздействия. При этом к 8-м суткам эксперимента в присутствии Fibro-Gide и Bio-Gide клетки показали рост пролиферативной активности на 19 и 12% соответственно по сравнению с контрольной группой. Клетки прикреплялись и распластывались на поверхности материалов, мигрируя в толщу пористых материалов Fibro-Gide и Spongostan.
Заключение: Наиболее благоприятным материалом для культуры клеток SHED является коллагеновый материал Fibro-Gide с достаточными пористостью, упругостью и гидрофильностью. Клетки SHED прикрепляются к коллагеновому матриксу и легко проникают в образец, заполняя все внутреннее пространство, при этом пролиферативная способность культуры клеток возрастает.
Keywords: cell adhesion; collagen; cytocompatibility; cytotoxicity.